FISH假阴性的双重/三重打击淋巴瘤

橙色雨丝

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在确定双重打击淋巴瘤上基因表达谱比FISH更敏感



Joanna Nikitorowicz-Buniak

Oct 22, 2019



弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL），是最常见的非霍奇金淋巴瘤亚型，由于生物学本质的不同，所以临床特征各异，预后因子众多。DLBCL的两个主要的生物学亚组分别是生发中心亚型（GCB）和活化B细胞亚型（ABC），其中ABC亚型预后较差。除了GCB和ABC亚型之外，高级别DLBCL可以根据是否存在MCY、BCL2/BCL6重排来进一步划分。存在这样的遗传学异常的被称为是双重/三重打击淋巴瘤，具有最差的预后。因此，DLBCL的分型对于患者的风险分层以及根据不同分子学亚组的生物学特性做针对性治疗是至关重要的。



最近的一项报告显示，大约30%的GCB-DLBCL的基因表达特征与双重打击相似（DHITsig）。然而，用标准的分离式FISH探针却只发现了其中一半存在MYC和BCL2重排。LauraHilton及同事在《血液》上发表的研究旨在找到更为敏感的检测双重打击这个导致GCB－DLBCL预后变差的生物学本质的方法。



方法



对20份来自GCB肿瘤的新鲜冷冻组织的DNA进行了全基因组测序（WGS），这些肿瘤组织都具有双重打击的特征（DHITsig+）但分离式FISH未能发现MYC和/或BCL2重排。也完成了拷贝数变化（CNVs）的分析。



主要发现



WGS发现了6例分离式FISH未能发现的高级别B细胞淋巴瘤-双重/三重打击（3例MYC重排和3例BCL2重排）。这些结果经免疫组化进行了确认。WGS结构变化检测出所有FISH确认的BCL2和MYC重排。所有隐秘的MYC易位都具有非IG的伙伴基因点位，而BCL2的易位则具有IG的伙伴基因。



在几个DHITsig+肿瘤中发现了影响MYC和相关下游通路的拷贝数变化，其中也包括影响MIR17HG的拷贝数增加（6/20）。SNP阵列拷贝数谱显示在DHITsig+的肿瘤中MIR 17HG和FCGR2B基因扩增，以及CDKN2A和22q11.22(IGL)缺失的“浓缩”。除此之外，作者未发现在DLBCL中11q异常和DHITsig之间存在联系。



结论



数据显示，在确定高级别B细胞淋巴瘤-双重/三重打击这种高危GCB-DLBCL上FISH有局限性。基因表达谱在明确双重打击的生物学特征上更加敏感。此外，DHITsig+与多种影响MYC，BCL2以及下游通路的遗传学异常相关。



参考文献：

1)    Cho MC et al., Prognosticimpact of germinal center B-cell-like and non-germinal center B-cell-likesubtypes of bone marrow involvement in patients with diffuse large B-celllymphoma treated with R-CHOP. Medicine (Baltimore). 2018 Nov;97(45):e13046.DOI: 10.1097/MD.0000000000013046

2)    Ennishi D et al., Geneticprofiling of MYC and BCL2 in diffuse large B-cell lymphoma determinescell-of-origin-specific clinical impact. Blood. 2017 May 18;129(20):2760-2770.DOI: 10.1182/blood-2016-11-747022

3)    Scott DW et al., High-gradeB-cell lymphoma with MYC and BCL2 and/or BCL6 rearrangements with diffuse largeB-cell lymphoma morphology. Blood. 2018 May 3;131(18):2060-2064. DOI:10.1182/blood-2017-12-820605

4)    Ennishi D et al., Double-HitGene Expression Signature Defines a Distinct Subgroup of Germinal CenterB-Cell-Like Diffuse Large B-Cell Lymphoma. J Clin Oncol. 2019 Jan20;37(3):190-201. DOI: 10.1200/JCO.18.01583

5)    Hilton LK et al., The doublehit signature identifies double-hit diffuse large B-cell lymphoma with geneticevents cryptic to FISH. Blood. 2019 Sep 16. pii: blood.2019002600. DOI:10.1182/blood.2019002600

J Clin Oncol. 2019 Jan 20;37(3):190-201.doi: 10.1200/JCO.18.01583.



双重打击基因表达特征定义了一组独特的生发中心B细胞样弥漫大B细胞淋巴瘤



Ennishi D1, Jiang A1,2, Boyle M1, CollingeB1, Grande BM2, Ben-Neriah S1, Rushton C2, Tang J2, Thomas N2, Slack GW1,Farinha P1, Takata K1, Miyata-Takata T1, Craig J1, Mottok A3, Meissner B1,Saberi S4, Bashashati A4, Villa D1, Savage KJ1, Sehn LH1, Kridel R5, MungallAJ6, Marra MA6, Shah SP4, Steidl C1, Connors JM1, Gascoyne RD1, Morin RD2,Scott DW1.



摘要



目的：



伴有MYC和BCL2和/或BCL6重排的高级别B细胞淋巴瘤（HGBL-DH/TH）在标准免疫化疗治疗后预后不良。我们旨在通过对基因表达的分析来了解此类淋巴瘤既有BCL2重排（HGBL-DH/TH-BCL2）又保留了弥漫大B细胞淋巴瘤形态的生物学本质。



患者和方法：



我们分析了来自157例原发的生发中心B细胞样（GCB）DLBCL的RNA测序的数据，其中包括25例HGBL-DH/TH-BCL2，据此确定了一个区分HGBL-DH/TH-BCL2和其它GCB-DLBCL的基因表达特征。为了解析此基因表达特征的遗传学、分子学和表型特点，我们分析了针对性的再测序、全外显子测序、RNA测序，以及免疫组化的数据。



结果:



我们开发了一个包含104个基因的双重打击特征（DHITsig），将27%的GCB-DLBCL归类到DHITsig阳性组，这当中只有一半具有MYC和BCL2的重排（HGBL-DH/TH-BCL2）。

DHITsig阳性的患者在R-CHOP方案治疗后与DHITsig阴性的患者相比结局较差（5年无进展生存率分别为57%和81%，P < .001），无论是否为HGBL-DH/TH- BCL2。DHITsig的预后预测的价值在一组独立的队列中得以确认。DHITsig的肿瘤在生物学上表现为非亮区生发中心细胞来源，包含与染色质改变相关的基因突变的独特的基因突变类型。一项新的基于NanoString Assay的研究(DLBCL90) 再现了其预后意义和RNA测序的作用。在25例DHITsig阳性的转化的滤泡性淋巴瘤中，11例被归类为HGBL-DH/TH- BCL2，而在50例 DHITsig阴性组中，没有1例被重新归类。此外，DHITsig与大部分具有高级别形态学特征的B细胞淋巴瘤相重合。

结论：



我们在GCB-DLBCL中定义了一组在临床上和在生物学特征上具有独特表现的肿瘤，其基因表达特征为HGBL-DH/TH- BCL2。可以据此对常规活检样品进行检查，并进一步探索如何利用这项检查来指导治疗。





Blood. 2019 Sep 16. pii: blood.2019002600.doi: 10.1182/blood.2019002600.



用双重打击特征来确认FISH无法发现的基因事件导致的双重打击弥漫大B细胞淋巴瘤



Hilton LK1, Tang J2, Ben-Neriah S3, AlcaideM4, Jiang A5, Grande BM1, Rushton CK1, Boyle M6, Meissner B3, Scott DW7,8,Morin RD9,2.



摘要：



伴有MYC和BCL2和/或BCL6重排的高级别B细胞淋巴瘤（HGBL-DH/TH）是一组在标准免疫化疗治疗下结局不良的弥漫大B细胞淋巴瘤。我们最近描述了一种基因表达特征，即所谓双重打击样表达模式（DHITsig），在一组GCB-DLBCL中发现27%具有这种特征并且有较差的预后，但是其中只有一半能够通过标准的分离式FISH发现存在MYC和BCL2的重排。



在此，我们对20例DHITsig阳性但未发现MYC和/或BCL2重排的GCB-DLBCL进行了全基因组测序，结果发现6个肿瘤具有对分离式FISH隐匿的MYC或BCL2重排。拷贝数分析显示，3个肿瘤存在MYC拷贝数增加，6个肿瘤存在MIR17HG拷贝数增加，两者都对MYC及其下游通路的失调可能有所贡献。仅在DHITsig阳性而没有MYC易位的肿瘤中发现PVT1启动子的删除，这可能是造成MYC过表达的原因。这些结果突出显示FISH不能发现所有的

HGBL-DH/TH，同时也揭示在DHITsig阳性的DLBCL中有其它一系列遗传学机制可以导致MYC失调，提示基因表达谱在确认较差预后的GCB-DLBCL上敏感性更高。



Copyright © 2019 American Society ofHematology.

PMID: 31527075 DOI: 10.1182/blood.2019002600

  

https://doi.org/10.1101/mcs.a004077



在一位伴有IGH/MYC和IGH/BCL2重排的高级别B细胞淋巴瘤患者中通过二代测序揭示MYC分离FISH探针假阴性的研究



Jess F. Peterson, Beth A. Pitel, StephanieA. Smoley, George Vasmatzis, James Smadbeck, Patricia T Greipp, Rhett P.Ketterling, William R. Macon, Linda Baughn

Molecular MedicineHealth SciencesResearchLaboratory Medicine and Pathology



摘要



在几种成熟B细胞淋巴瘤中确认MYC重排对于诊断和预后判断都至关重要。商业的FISH探针，包括IGH/MYC双色双融合（D-FISH），以及MYC分离探针（BAPs），是检测MYC重排的主要方法。然而，孤立的采用IGH/MYC D-FISH或MYC BAP FISH都有报告说存在假阴性的结果，原因是MYC基因所在的8q24区域的重排非常复杂。在此我们报告一位60岁的男性患者，被诊断患有高级别B细胞淋巴瘤，MYC BAP FISH阴性，但BCL2和BCL6 BAP FISH阳性。根据我们目前的实验室规程，要同时用MYC BAP和IGH/MYC D-FISH来检查MYC基因区域，因此我们又进行了IGH/MYC D-FISH的检查，结果发现了IGH/MYC融合。为了进一步弄清楚为什么用不同的FISH探针得出了不同的关于MYC重排的结果，我们采用了二代测序的方法，用配对测序（MPseq），发现在MYC基因的下游有一小段插入（~200 kb）的IGH基因座，这段插入无法通过MYC BAP发现。此例充分证明了同时采用IGH/MYC D-FISH和MYC BAP来检测潜在的隐匿MYC重排的重要性，同时，也证明了MPseq发现FISH无法发现的复杂的结构性重排以及拷贝数异常的能力。

橙色雨丝

解读：

1） 最初，弥漫大B细胞淋巴瘤在分型的时候只需要根据免疫组化和Hans模型分为GCB和Non-GCB就行了，前者预后相对较好；

2） 后来发现，MYC（>40%）和BCL2（>50%-70%）双表达的弥漫大B细胞淋巴瘤，主要是Non-GCB亚型的，具有明显较差的预后；

3） FISH发现，在双表达的淋巴瘤当中，特别是GCB亚型的淋巴瘤，一部分同时存在MYC和BCL2的重排，有的还额外存在BCL6的重排，这代表了预后最差的一组弥漫大B细胞淋巴瘤；

4） 于是，WHO在2016年更新淋巴造血系统肿瘤分类系统的时候，设立了一个叫做“有MYC和BCL2和/或BCL6重排的高级别B细胞淋巴瘤”独立的分型，即所谓双重打击或三重打击淋巴瘤；

5） 目前，国际的指南上要求对所有的弥漫大B细胞淋巴瘤都进行MYC，BCL2和BCL6的FISH研究，以排除双重/三重打击，国内的常见做法是仅对MYC高表达的病例做FISH；

6） BCL2和BCL6的重排，伙伴基因一般是IG基因，绝大多数是IGH基因，所以，在做FISH的时候一般采用IGH/BCL2和IGH/BCL6融合探针，而MYC重排的伙伴基因则是五花八门，可以是IG基因（IGH，IGK，IGL），也可以不是IG基因，所以，一般实验室喜欢用分离式探针来检测MYC基因是否断裂，而不去管它的伙伴基因是谁。这就产生了一个问题，假如MYC基因的异常不是由一个明显的染色体易位，比如说经典的t (8;14) 易位引起的，而是由一个很小、很隐匿的插入（insertion）引起的，那么分离式探针可能会出现假阴性的情况，即不能发现这个重排。所以，对于MYC，务必要同时做MYC分离以及融合的FISH检查；

7） 更进一步说，MYC的失调并不仅仅是因为重排才会发生，基因拷贝数的增加，负责转录调控的基因的突变等遗传学“事件”，都会造成MYC的失调，对于这样的“准双重/三重打击”，或者“双重/三重打击样”的淋巴瘤，我们怎么来define呢？研究者提出的建议是通过二代测序的技术，用基因表达谱来判断是否具有DOUBLE HIT的SIGNATURE，即是否符合所谓的DHITsig，如果符合，那么要将这些淋巴瘤当作是双重/三重打击（其实相当一部分通过FISH发现确实是双重/三重打击）来治疗；

8） 不过，我们目前除了知道用R-CHOP来治疗双重/三重打击效果欠佳之外，并不知道其它方案是否一定更优。虽然DA-EPOCH-R方案的采用越来越普遍，目前仍然没有足够证据显示在这样的治疗下双重/三重打击患者的结局更好。少量证据显示，虽然在PFS上强化疗的方案更优，但是在OS上却未能发现有明显的改善；

9） 所以，这样的研究虽然很有意义，但是其意义主要是在预后判断上，我们迫切需要在临床治疗上有更多的突破，尽快赶上学术研究的步伐，否则，虽然分类越来越细，预后判断越来越准确，检测手段（比如说二代测序）也越来越多，但是真正有效治疗手段仍然屈指可数。

健康简单

请教雨丝哥哥，指南中，对弥漫大b需要移植的指征，都有哪些？

橙色雨丝

健康简单 发表于 2019-11-6 15:30
请教雨丝哥哥，指南中，对弥漫大b需要移植的指征，都有哪些？

只有一个，那就是复发难治。

橙色雨丝

健康简单 发表于 2019-11-6 15:30
请教雨丝哥哥，指南中，对弥漫大b需要移植的指征，都有哪些？

只有一个：复发难治。

健康简单

橙色雨丝 发表于 2019-11-6 15:47
只有一个：复发难治。

谢谢哥哥！哪些指标代表难治？

橙色雨丝

健康简单 发表于 2019-11-6 16:40
谢谢哥哥！哪些指标代表难治？

很多。

健康简单

橙色雨丝 发表于 2019-11-6 17:18
很多。

Ki67是85%，myc是大于等于40%，算难治吗？

橙色雨丝

健康简单 发表于 2019-11-6 18:30
Ki67是85%，myc是大于等于40%，算难治吗？

难治主要指的是一线化疗不能完全缓解。

健康简单

橙色雨丝 发表于 2019-11-7 08:33
难治主要指的是一线化疗不能完全缓解。

谢谢雨丝哥！